外泌体浓缩柱

产品货号：

HR8216

中文名称：

外泌体浓缩柱

英文名称：

Exosomes concentrate column

产品规格：

1套

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本产品是一种方便的外泌体浓缩工具，只需要低速离心操作即可以用来对外泌体液体样本进行浓缩，还可以用于外泌体纯化。也可以用来对外泌体样品中的盐分、糖类、核酸及其他一些低分子量物质进行去除和缓冲液置换。还可以用来分离外泌体标记时未结合上的游离标记物。

本产品使用外泌体低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于外泌体沉淀法外泌体浓缩。

产品特点

高回收率＞90%；
垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达5分钟；
热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
100%完整性检测确保性能可靠；
透明外壳和体积刻度方便样品察看；
直接吸取样品减少处理步骤；
高浓缩倍数：高达80～100倍。

对稀释或从预先纯化的外泌体进行浓缩；
细胞培养提取物外泌体组分的纯化；
外泌体缓冲液更换。

初始样本的最大体积	500μL
最终浓缩液的典型体积	15～20μL
建议浓缩离心力	10000×g
建议反转离心力	1000×g
最大的相对离心力	12000×g
有效膜面积	1cm2
截留体积	＜5μL
过滤管和管子长度	49.9mm(浓缩模式；浓缩管插在管中)
过滤管和管子长度	47.4mm(反转离心；浓缩管倒着插在管中)
管直径	10.8mm(已盖上盖子)
管长度	42.1mm(已盖上盖子)
过滤浓缩管直径	9.4mm
过滤浓缩管长度	29.5mm
过滤浓缩管材料	苯乙烯共聚物/丁二烯
滤膜材料	低蛋白结合再生纤维素膜
收集管材料	聚丙烯

在使用前，请检查样本是否符合浓缩管的化学相容性。
离心浓缩管适用于生物液体和水溶液。
不能使用：丙酮、乙腈、苯、四氯化碳、氯仿、二甲基亚砜、乙酸乙酯、甲醛、吡啶、四氢呋喃、甲苯。

不同的外泌体浓缩的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和外泌体样品纯度，所用buffer类型，外泌体的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下浓缩速度；
如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
浓缩管浓缩外泌体会有外泌体损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长；
样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩或样本穿过滤膜造成的。
吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤浓缩管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收浓缩后的样本。
如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
样本有可能穿过滤膜，务必将每次滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
加外泌体液或Buffer到浓缩管时，可以用蓝枪头；但从浓缩管底吸取浓缩好的目的外泌体时，必须用黄枪头；用枪头伸入浓缩管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
用过的浓缩柱要保持过滤膜湿润，不能干掉。

一、浓缩方法：

将内管插入所提供的一个微量离心管中。
向内管中加入不超过500μL的样本，并盖上盖子。
将盖好盖子的浓缩管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
以2000～10000×g离心约10～30分钟。

注：
- 务必将滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
- 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μL样本的典型离心时间大约是10至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤，但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积（15～20μL）。
离心结束后将整个浓缩管从离心机中取出，取出内管。
为了回收浓缩后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1000×g离心2分钟，使浓缩后的样本从浓缩内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
注：
- 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
- 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。

二、换液方法：

注意事项：
- 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有150mM盐分的溶液在第一次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变，依然是150mM。再往浓缩管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。
- 这个过程我们将它称为等体积过滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到最低。
- 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解，则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品浓缩后，然后加入目的缓冲液，再进行反复的稀释和浓缩。
操作步骤：
- 把样品置于过滤装置的储液管中；
- 在特定的离心力下和推荐的时间进行离心；
- 将滤过液从滤管中取出，放置一旁；
- 加入需要更换的缓冲液使样品体积达到0.5mL；
- 再次离心；
- 取出滤过液，放置一旁；
- 再次加入需要更换的缓冲液
- 回收已换液样品。
  注：
  - 如果需要可以进行3次换液。
  - 请将两次的滤过液一直保留到换液的样品分析测试完成。

三、清洗和保存：

使用后用水冲洗干净；
内管加入超纯水500μL，5000×g离心5分钟；
净内管中的水，加入500μL 0.1M NaOH，5000×g离心20分钟；
用0.1M NaOH浸泡24小时；
用水冲洗干净；
用无菌水浸泡2～8℃保存。
注：
- 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH保存！更长时间的话加0.02%的叠氮钠。
- 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。
外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。

外泌体浓缩管会损失外泌体吗？
外泌体损失很小。
膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为浓缩管有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10～20μL。
可以重复使用浓缩管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
外泌体在浓缩时出现了沉淀，如何改进？
外泌体如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起外泌体沉淀。建议外泌体浓缩后的最终浓度不要太高。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的外泌体，建议的改进方法是：
- 离心力降低30%～50%
- 在浓缩过程中取出浓缩管，用枪头反复吹吸几次
浓缩后发现浓缩液中没有目的外泌体，可能的原因有哪些？
请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
- 如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
  - 使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
  - 离心机最近是否有校准过？
- 如果目的样本也不在滤过液中，那么：
  - 外泌体样本起始浓度是否很低，甚至不存在？
  - 用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
  - 目的外泌体是不是沉淀了？
- 有时候用外泌体浓缩离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。
最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到外泌体的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加外泌体样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
浓缩管可以用酒精消毒灭菌么？
浓缩管与70%乙醇是兼容的。
是否可以用于高压灭菌？
不可以，浓缩管都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
是否无热源？
均非无热源的。
如何对外泌体浓缩管进行去除内毒素的处理？
提供的浓缩管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10～1000KD之间不等，在浓缩的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer清洗的步骤去除大部分内毒素。
是否不含RNA酶？
我们不保证浓缩管不包含RNA酶，如果需要处理无Rnase样品，建议您可以用0.1% DEPC在37℃浸泡2小时，以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
如何判断浓缩管已经失效？
在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩外泌体液中不含有外泌体或量很低（包括目的外泌体），而第一次的滤下液中含有目的外泌体，则说明滤膜失效，需要换新的浓缩管。

产品目录